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产品名称                                         单位            货号

2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)       1 ml    MF738-ND-01

2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)     5×1 ml    MF738-ND-05

2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)    10×1 ml          MF738-ND-10

2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (with Green dye)   100×1 ml          MF738-ND-100

【储存条件】

长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。

【产品简介】

本产品包含高纯度M5 SuperLight Taq HiFi DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂，浓度为2×。M5 SuperLight Taq HiFi DNA 聚合酶比普通Taq酶扩增效率高、错配率低，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快（10-15秒1kb）等优点。可最大限度地减少人为误差，可用于高特异性PCR反应及GC含量较高（>60%）具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物的3’端附有一个突出的"A"碱基，纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF019或MF020)。 本产品有不含染料，在PCR 反应完成后，需添加上样缓冲液才能上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。

【产品组份】

2x M5 SuperLight Taq HiFi PCR MasterMix (without dye)    1ml

Nuclease-free ddH₂O                                   1ml

【适用范围】

 1.基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物，如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析（SNP）等。

【引物设计注意事项】

引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；

引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；

引物3’端应避免出现发夹结构，GC含量控制在40-60%之间；

正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳，Tm值调整至55-65℃为佳；

引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；

引物A、G、C、T整体分布要尽量均匀，避免使用GC或者AT含量高的区域。

避开引物内部或者两条引物之间有5个碱基以上的互补序列，两条引物的3’端避免有3个碱基以上的互补序列；

引物设计完毕请使用NCBI BLAST功能检索引物特异性，以避免非特异性扩增产生。

【质量控制】

核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind III在37℃下孵育16 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带不发生变化。

功能检测：

以10 ng人基因组DNA为模板，可以很好扩增2.6 kb的目的片段；

以10 ng小麦基因组DNA为模板，可以很好扩增4 kb的目的片段；

以10 ng烟草基因组DNA为模板，可以很好扩增1.3 kb的目的片段(AT含量为72%)；

以50 ng HeLa 细胞总RNA对应的cDNA为模板，可以很好扩增4.8 kb的目的片段。

【所需试剂】

使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。

<*模板量：10~1000 ng 基因组 DNA，1~30 ng 质粒，或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系>。