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说明书：

MF273-M5 PAGE Gel DNA Purification Kit PAGE胶DNA纯化试剂盒.pdf

产品名称                                         单位          货号

M5 PAGE Gel DNA Purification Kit   50T            MF273-01

M5 PAGE Gel DNA Purification Kit  200T           MF273-04

【储存条件】

按照指定温度储存，12个月内不影响使用效果。储存事项：避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

【产品简介】

本试剂盒采用新型硅基质膜离心柱及特殊的缓冲液系统，可从聚丙烯酰胺凝胶中简捷高效回收20bp-500bp的短片段DNA 片段，回收效率可高达85%。并可最大限度去除杂质，获得高纯度的DNA，所得到的 DNA 可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。

【产品特色】

适用范围广泛，可以回收20bp-2kb的单链或者双链DNA。

使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。

快速、方便离心柱型，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

【产品组份】

【注意事项】

所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。也可以选择可见光染料染色后在可见光下切胶会避免紫外对DNA损伤。

回收率与片段大小、凝胶浓度、初始DNA量和洗脱体积有关。

【平衡液使用】

介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。

使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡缓冲液至柱子中。13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

【操作步骤】

<第一次使用前请先在Binding Buffer瓶中加入指定量异丙醇! >

<第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!>

切取含DNA片段的PAGE凝胶（100 mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入1.5 mL离心管中，用移液枪头尽可能捣碎（最好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎），捣得越细越好。

向凝胶中加入1-2倍体积的Diffusion Buffer（如100mg凝胶加入100-200μl Diffusion Buffer），55℃温浴30分钟-2小时，期间每15分钟涡旋震荡混匀，促进胶中DNA扩散到溶液中。

     一般来说，回收片段越大，DNA扩散需要的时间越长，100bp左右的DNA片段温浴30分钟就可以（时间长些也不影响回收效果）；如果回收 500bp-1000bp的DNA片段，可以将温浴时间延长3-5个小时。也可以37℃温浴12-16小时过夜。

12,000rpm离心5分钟。小心取上清转入新的离心管。记录上清体积。

加入9倍上清体积的Binding Buffer，混匀。

     回收片段>100bp时，加5倍上清体积的Binding Buffer即可。

平衡液预处理吸附柱：

使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”

将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

  吸附柱最大容积为750µl，若溶液体积大于750µl，可分批加入。

加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

重复步骤6一遍。

将吸附柱EC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加30-50μl 洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较高浓度核酸，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于25μl，体积过小降低核酸洗脱效率，减少产量。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。